研生試劑-細胞因子受體檢測的基本技術

1．活細胞吸收試驗  將過量的待測細胞與*細胞因子(配基)共孵育，若細胞膜表面存在相應的受體即可吸收配基，通過測定回收后配基生物活性的喪失情況可確定受體是否存在。此法簡便，適用于定性，但不適用于定量檢測。

    2．核素標記重組配基的放射受體分析

    這是確定細胞受體分布及其特性的主要方法，可測定受體的數量及親和力。一般采用：①重組細胞因子體外標記核素；②利用cDNA轉錄獲得足夠量的細胞因子mRNA，注入非洲爪蟾卵母細胞內，在體外翻譯的底物中加入核素標記的氨基酸(如³⁵S-Met或3H-Leu等)。通過生物合成內標記產生的重組細胞因子的功能不受影響，因此適用于某些穩定性較差的細胞因子的檢測。

    3．抗受體McAb法  利用McAb既可通過封閉受體抑制相應細胞因子的生物學活性進行受體檢測，也可用標記的McAb直接作免疫放射受體分析或免疫沉淀。

    4．重組細胞因子與受體的交聯分析

    利用化學交聯劑將標記的重組細胞因子與膜受體交聯，細胞裂解物經PAGE后進行放射自顯影分析，通過帶型分析可確定受體的分子量及亞單位。

    5．受體cDNA分析  分子克隆是在基因水平上研究細胞因子受體的*途徑，通過核苷酸序列推導的氨基酸順序進行結構功能區分析，是深入探討受體作用機制的基礎。受體cDNA片段可用來制作cDNA探針以研究受體基因的轉錄功能及表達調控。此外還可利用基因工程技術重組受體分子。目前已有10多種細胞因子受體的基因被克隆出來，包括IL-1R，IL-2Ra，IL-2即，IL-3R，IL-4R，IL-6R，IL-7R，INF/R，MPOR，M-CSFR等。

    6．可溶性細胞因子受體的檢測  某些細胞因子受體除存在于細胞膜外，尚可分泌進入體液，稱為可溶性細胞因子受體(solublecytokinereceptor)，如slL-2R，slL-4R和slFN-yR。這類受體多采用免疫學方法檢測。下面以IL-2R為例介紹細胞因子受體的檢測方法，這些方法也適用于其他細胞因子受體的檢測。