磺胺甲惡唑（SMZ）ELISA試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

1 使用目的：

本磺胺甲惡唑（SMZ）試劑盒用于飼料、魚、蝦和肉類組織（如雞、牛肉和豬肉），血清和尿樣中磺胺甲惡唑（SMZ）殘留的定量檢測。

2 實(shí)驗原理

本磺胺甲惡唑（SMZ）試劑盒采用競爭ELISA 方法，在微孔板包被有磺胺甲惡唑（SMZ）偶聯(lián)抗原，加入磺胺甲惡唑（SMZ）標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，游離磺胺甲惡唑（SMZ）與微孔條上預(yù)包被的磺胺甲惡唑（SMZ）偶聯(lián)抗原互相競爭抗磺胺甲惡唑（SMZ）抗體酶標(biāo)記物，用TMB 底物顯色，加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色，用酶標(biāo)儀在450nm 波長下進(jìn)行檢測，吸光值與樣品中磺胺甲惡唑（SMZ）含量成反比，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中磺胺甲惡唑（SMZ）的含量。

3 試劑盒組成

3.1 預(yù)包被的磺胺甲惡唑（SMZ）偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板：1 塊（12 孔×8 條）。

3.2 磺胺甲惡唑（SMZ）標(biāo)準(zhǔn)品：6 瓶（1ml/瓶），含量分別是： 0 ppb，0.1 ppb,0.3 ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1 ppb。

3.3 磺胺甲惡唑（SMZ）抗磺胺甲惡唑（SMZ）抗體酶結(jié)合物：1 瓶（6ml）。

3.4 顯色液A：1 瓶（6ml）。

3.5 顯色液B：1 瓶（6ml）。

3.6 終止液：1 瓶（6ml），2M 硫酸。

3.7 樣本稀釋液：1 瓶（10×, 6ml），用于樣品稀釋用。

3.8 濃縮洗滌液：1 瓶（20×，20ml），用于洗板。

3.9 說明書一份。

4 需要而未提供的材料

4.1 磺胺甲惡唑（SMZ）設(shè)備

4.1.1波長450nm酶標(biāo)儀。

4.1.2粉碎機(jī)。

4.1.3量筒。

4.1.4振蕩器。

4.1.5漏斗。

4.1.6Whatman 或相當(dāng)?shù)臑V紙。

4.1.7微量移液器。

4.2 試劑

4.2.1去離子水或蒸餾水。

4.2.2 甲醇。

5 貯存

5.1 磺胺甲惡唑（SMZ）試劑盒貯存于2~8℃，切勿冷凍

5.2 未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存

6 注意事項

6.1 使用試劑盒前請仔細(xì)閱讀說明書。

6.2 不要使用過期試劑盒。

6.3 試劑盒使用前，將試劑恢復(fù)至室溫（25±2℃），建議至少回溫2小時。

6.4 標(biāo)準(zhǔn)品中含有磺胺甲惡唑（SMZ），使用時應(yīng)特別注意，操作時應(yīng)帶手套。

6.5 終止液中含有硫酸，使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。

6.6 不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不能混用，否則會影響試驗結(jié)果。

6.7 不同批號試劑盒中的磺胺甲惡唑（SMZ）試劑不得混用；不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不得混用，否則會影響實(shí)驗結(jié)果。

6.8 稀釋樣本時必須用本試劑盒中的樣本稀釋液，否則會影響實(shí)驗結(jié)果

6.9 混合試劑時應(yīng)避免起泡。

7 工作液準(zhǔn)備

7.1 磺胺甲惡唑（SMZ）標(biāo)準(zhǔn)品溶液：0ppb,0.1ppb,0.3 ppb,0.9ppb,2.7 ppb,8.1ppb

7.2 濃縮洗滌液：用蒸餾水按1:20（1+19）稀釋備用

7.3 樣本稀釋液：用蒸餾水按1:10（1+9）稀釋備用

7.3 顯色劑：磺胺甲惡唑（SMZ）已備用，避免光線直照

7.4 反應(yīng)終止液：已備用

8 樣品處理程序（樣品在提取過程中，要嚴(yán)格按說明書操作，提取過程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋，否則會出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確，樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存）

8.1取10g粉碎的樣品，加 20ml 70%甲醇溶液

8.2強(qiáng)力振蕩3分鐘

8.3用Whatman 濾紙過濾

8.4取25μl處理后的樣品，加入25μl樣本稀釋液于反應(yīng)孔中（樣本稀釋倍數(shù)為2）