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大鼠結(jié)締組織生長因子(CTGF)試劑盒實驗原理說明

時間:2014/10/15閱讀:695
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大鼠結(jié)締組織生長因子(CTGF)試劑盒實驗原理說明

本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍: 48T
100 ng/L-2000 ng/L

使用目的:
大鼠結(jié)締組織生長因子(CTGF)試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中結(jié)締組織生長因子(CTGF)含量。
實驗原理
大鼠結(jié)締組織生長因子(CTGF)試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠結(jié)締組織生長因子(CTGF)水平。用純化的大鼠結(jié)締組織生長因子(CTGF)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入大鼠結(jié)締組織生長因子(CTGF),再與HRP標記的結(jié)締組織生長因子(CTGF)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的結(jié)締組織生長因子(CTGF)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠結(jié)締組織生長因子(CTGF)濃度。 
試劑盒組成 
1 20倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 3ml×1瓶
2 酶標試劑 3ml×1瓶 8 標準品(4000 ng/L) 0.5ml×1瓶
3 酶標包被板 12孔×4條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 3ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 3ml×1瓶 11 封板膜 2張 
6 顯色劑B液 3ml×1/瓶 12 密封袋 1個
標本要求 
1.
大鼠結(jié)締組織生長因子(CTGF)標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2000 ng/L 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
1000 ng/L 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
500 ng/L 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
250 ng/L 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
125 ng/L 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2. 加樣:大鼠結(jié)締組織生長因子(CTGF)分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 
4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:
大鼠結(jié)締組織生長因子(CTGF)每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

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