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原代細胞純化注意細節:
1、 移棄使用過的細胞培養基。
2、使用不包含有鈣鎂的平衡鹽溶ye或EDTA清洗細胞。在培養瓶背著細胞的一面加入清洗溶液,通過轉動培養瓶1到2分鐘清洗細胞層,然后去除清洗液。
3、加入yi 酶消化,消化細胞與細胞,操作手法,試劑的效價有密切的關系,消化時應注意觀察細胞形態,如細胞變得橢圓透亮,并且可以觀察到細胞與細胞間的間隙時,輕拍瓶身可以看見成流沙狀,即可中止消化,消化時盡量減少對細胞的吹打。
4、當細胞wan全分離時,垂直放置培養瓶,讓細胞流到培養瓶的底部。在培養瓶中加入wan全培養基中止消化,計數并再次培養細胞。
5、對于無血清培養基,加入大豆yi 蛋白酶抑制劑。通常使用1∶1(v∶v)0.25 mg/mlyi 蛋白酶抑制劑到yi 蛋白酶中將抑制yi 蛋白酶活性。
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