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ELISA試驗手工洗滌操作

時間:2025/3/3閱讀:22
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ELISA試驗手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種方法:

一、浸泡式

1.吸干或甩干孔內反應液;

2.用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去);

3.浸泡,即將洗滌液注滿板孔,放置1~2分鐘,間歇搖動,浸泡時間不可隨意縮短;

4.吸干孔內液體。吸干應徹di,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;

5.重復操作步驟3和4,洗滌3~4次(或按說明規定)。在間接法中如本底較高,可增加洗滌次數或延長浸泡時間。

微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質的結合是疏水性的,非離子型洗滌劑既含疏水基團,也含親水基團,其疏水基團與蛋白質的疏水基團借疏水鍵結合,從而削弱蛋白質與固相載體的結合,并借助于親水基團和水分子的結合作用,使蛋白質回復到水溶液狀態,從而脫離固相載體。

洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,其濃度可在0.05%~0.2%之間,高于0.2%時,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度。

二、流水沖洗式

流水沖洗法最初用于小珠載體的洗滌,洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時附接一特殊裝置,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗,持續沖洗2分鐘后,吸干液體,再用蒸餾水浸泡2分鐘,吸干即可。浸泡式猶如盆浴,流水沖洗式則好比淋浴,其洗滌效果更為徹di,且也簡便、快速。

已有實驗表明,流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時設法加大水流量或加大水壓,讓水流沖擊板孔表面,洗滌效果更佳。


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