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制取抗體應采用什么方法原理？
閱讀：1351 發(fā)布時間：2014-9-3 
抗體也是有著多種類型及不同種屬的，制取抗體應采用什么方法原理？
免疫細胞化學的技術關鍵之一是制備特異性強、親合力大、滴度高的特異性抗體，由于每種抗原都有幾個抗原決定簇，用它免疫動物將產生對各個決定簇的抗體，即多克隆抗體。單克隆抗體免疫球蛋白屬同一類型，質地純一，而且它是針對某一抗原決定簇的，因此特異性強，親合性也一致。
如何選擇正確的抗體制備技術？
從分離到表達：不同的抗體重組技術可以用于制備不同的抗體，工業(yè)上和學術界都發(fā)展了許多相關的技術，噬菌體展示就是其中的主導技術。昆蟲和哺乳動物細胞的表達系統從理論上而言是相似的，但是其它的分子進化類型需要重新提煉和分離抗體。
【抗血清質量的評價】
1. 效價
放射免疫法：以不同稀釋度的抗血清與標記抗原混合，孵育24h后，測定其結合率。通常以結合率為50%的血清稀度和為效價。如某抗血清的結合率為50%時的稀釋度為1：15000，則該血清的效價就是1：15000。抗血清的效價，除由抗血清本身的性質決定外，還受標記抗原的質量、孵育時間，所用稀釋液的成分及其pH等因素的影響，在工作中必須引起注意。
雙向擴散法：利用大分子抗原和抗體在瓊脂平板上擴散，兩者在相交處產生沉淀線，以觀察和判斷抗血清中是否有抗體及其濃度。
球脂板的制備：100ml pH7.1 的磷酸鹽緩沖液加到15g的瓊脂內，于水浴中加溫，攪拌，使瓊脂*溶解，趁熱用紗布過濾，待溶液冷卻到65℃左右時，加入疊氮鈉，使其在溶液中的濃度為0.1%。用移液管把瓊脂放在干凈平皿或玻片上，約3mm厚，待其冷卻，*凝固后，用打孔器打孔。中央孔內加適量抗原，周圍各孔內分別加入50μl 1:2、1:4、1:8、1:16、1:32及不稀釋的抗血清，37℃下孵育24h，觀察有無沉淀線產生，以判斷血清的稀釋度。
2. 特異性測定
抗血清的特異性或稱專一性是指抗血清對相應的抗原及近似的抗原物質的識別能力。特異性好就是抗血清的識別能力強。通常，特異性是以交叉反應率來表示的。交叉反應率低，表示抗血清的特異性好，反之則特異性差。交叉反應率一般是用競爭抑制曲線來判斷的。以不同濃度的抗原和近似抗原物質分別做競爭抑制曲線，計算各自的結合率（B/T或B/B0），求出各自在IC50時的濃度，按下列公式計算交叉反應率。
S=y/Z×100%
S：交叉反應率，y：IC50時抗原濃度，Z：IC50時近似抗原物質的濃度。
如某抗原的IC50濃度為90Pg/管，而一些近似抗原物質IC50濃度幾乎是無限大，可以說這一抗血清與其它抗原物質的交叉反應率近似零，即無交叉反應，該抗血清的特異性是好的。
3. 親合力
在免疫學中，親合力是指抗體與結合抗原體的活度或牢固度。抗體與抗原結合疏松，結合后會迅速解離，稱為親合力低，反之，親合力高。親合力的高低是由抗原分子的大小，抗體分子的結合位點與抗原的決定基之間的立體結構型的合適程度決定的。親合力常以親合常數K表示。K的單位是升/摩爾。在RIA中，K是該抗血清能達到的zui小檢出量的倒數，K=1/[H]，[H]是zui小檢出量，通常，K的范圍在108～1012L/mol之間，也有高達1014L/mol的。
計算親合常數的方法20余種，計算出的K都不能真實反映實驗情況，只能作為參考。
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