ELISA試劑盒是以免疫學反應為基礎
ELISA試劑盒是以免疫學反應為基礎，將抗原、牽9體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。由于抗原、ELISA試劑盒抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，ELISA試劑盒從而保證試驗結果的特異性與穩定性。在實際應用中，通過不同的設計，具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法(圖a)、用于檢測抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。1. 試劑
(1) 包被緩沖液(PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液):
NaCO３ 1.59克
NaHCO３ 2.93克
加蒸餾水至1000ml
(2) 洗滌緩沖液(PH7.4 PBS)：0.15M
KH2PO4 0.2克
Na2HPO４·12H2O 2.9克
NaCl 8.0克
KCl 0.2克
Tween-20 0.05％ 0.5ml
加蒸餾水至1000ml
(3) 稀釋液：
牛血清白蛋白(BSA) 0.1克
加洗滌緩沖液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10％使用。
(4) 終止液(2M H２SO４）：
蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸(98％)21.7ml。
(5) 底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):
0.2M Na２HPO４(28.4克／L) 25.7ml
0.1M 檸檬酸(19.2克／L) 24.3ml
加蒸餾水50ml。
(6) TMB(四甲基聯苯胺)使用液:
TMB(10mg／5ml無水乙醇) 0.5ml
底物緩沖液(PH5.5) 10ml
0.75％H２O２ 32μl
(7) ABTS使用液:
ABTS 0.5mg
底物緩沖液(PH5.5) 1ml
3％H２O２ 2μl
(8) 抗原、抗體和酶標記抗體。
(9) 正常人血清和陽性對照血清。
比較常用的是ELISA試劑盒雙抗體夾心法及ELISA試劑盒間接法。 將抗原、牽9體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩定性。在實際應用中，通過不同的設計，具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法(圖a)、用于檢測抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA試劑盒雙抗體夾心法及ELISA試劑盒間接法。
