細(xì)胞增殖檢測(cè)的應(yīng)用相當(dāng)廣泛，不論是測(cè)試藥物試劑還是生長(zhǎng)因子的效果，不論是評(píng)估細(xì)胞毒性還是分析細(xì)胞活性狀態(tài)，您都可能會(huì)用到它。細(xì)胞增殖檢測(cè)一般是檢測(cè)分裂中的細(xì)胞數(shù)量或者細(xì)胞群體發(fā)生的變化。細(xì)胞增殖檢測(cè)主要分為四類(lèi)：DNA合成檢測(cè)、代謝活性檢測(cè)、細(xì)胞增殖相關(guān)抗原檢測(cè)和ATP濃度檢測(cè)。在這些方法中作何選擇，主要取決于您所研究的細(xì)胞類(lèi)型和研究方案。DNA合成檢測(cè)是目前實(shí)驗(yàn)室中檢測(cè)細(xì)胞增殖zui準(zhǔn)確可靠的方式。傳統(tǒng)方法是，將放射性標(biāo)記的3H-胸腺嘧啶與細(xì)胞一同孵育幾小時(shí)或者孵育過(guò)夜。這樣新增殖細(xì)胞的DNA中就會(huì)摻入放射性標(biāo)記，經(jīng)洗脫后可用閃爍計(jì)數(shù)器SC檢測(cè)。該方法時(shí)間耗時(shí)長(zhǎng)而且還有個(gè)明顯的弊端，那就是使用和處理放射性物質(zhì)既麻煩又不安全。不過(guò)，您還可以使用5-溴-2-脫氧尿苷BrdU來(lái)進(jìn)行類(lèi)似實(shí)驗(yàn)，因?yàn)锽rdU也同樣可以摻入到新合成的DNA中。不過(guò)這樣就需要進(jìn)行額外的實(shí)驗(yàn)步驟，先孵育特異性BrdU單抗和帶標(biāo)記的二抗，然后再進(jìn)行比色法、化學(xué)發(fā)光檢測(cè)或熒光信號(hào)檢測(cè)等步驟。該方法的好處就是讓您不需要再和放射性物質(zhì)打交道。BrdU標(biāo)記很適合免疫組化IHC、免疫細(xì)胞化學(xué)IC、細(xì)胞內(nèi)ELISA、流式細(xì)胞分析和高通量篩選。代謝活性檢測(cè)檢測(cè)細(xì)胞群體的代謝活性也可以反映細(xì)胞增殖的情況。在細(xì)胞增殖過(guò)程中乳酸脫氫酶的活性會(huì)增加，因此四唑鹽或者Alamar Blue在代謝活躍的細(xì)胞環(huán)境中會(huì)逐漸減少，形成能夠改變培養(yǎng)基顏色的甲臜染料。您可以通過(guò)低配置或高配置的分光光度計(jì)和酶標(biāo)儀來(lái)讀取含染料培養(yǎng)基的吸光度，從而衡量細(xì)胞的代謝活性，檢測(cè)細(xì)胞增殖的情況。中是不溶的，而且其生成的甲臜晶體需要溶解在DMSO或者異丙醇中。因此，MTT主要作為終點(diǎn)檢測(cè)方法。其他三種鹽與Alamar Blue一樣，都是可溶且無(wú)毒的。它們可以作為連續(xù)監(jiān)控手段來(lái)跟蹤細(xì)胞增殖的動(dòng)態(tài)改變。其中XTT的效率較低，需要添加額外的因子。而WST1更靈敏有效，與其他鹽相比能夠更快顯色。Alamar Blue的靈敏度也很高，只要微孔板的孔中有100個(gè)細(xì)胞它就能夠檢測(cè)到。四唑鹽和Alamar Blue氧化還原染料能夠用于多種儀器和高通量研究，非常方便。它們適用的檢測(cè)儀器包括：標(biāo)準(zhǔn)分光光度計(jì)、熒光分光光度計(jì)和酶標(biāo)儀等。
有些抗原只存在于增殖細(xì)胞中，而非增值細(xì)胞缺乏這些抗原，您也可以通過(guò)特異性的單抗來(lái)對(duì)細(xì)胞增殖進(jìn)行檢測(cè)。例如，在人體細(xì)胞中，Ki-67抗體識(shí)別同名蛋白，在細(xì)胞周期S期、G2期和M期表達(dá)，而在G0期和G1 期（非增殖期）不表達(dá)。用針對(duì)Ki-67蛋白的單抗就可以檢測(cè)細(xì)胞的增值情況。由于需要組織切片，這種方法無(wú)法進(jìn)行高通量分析。不過(guò)這一方法頗受癌癥研究者們的青睞，因?yàn)樗軌蛴脕?lái)檢測(cè)體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的增殖。其他普遍使用的細(xì)胞增殖或細(xì)胞周期調(diào)控標(biāo)志還包括，增殖細(xì)胞核抗原PCNA、拓?fù)洚悩?gòu)酶IIB和磷酸化組蛋白H3。
細(xì)胞內(nèi)的ATP含量受到了嚴(yán)格調(diào)控，檢測(cè)ATP也可以得到細(xì)胞增殖的信息。死亡細(xì)胞或即將死亡的細(xì)胞幾乎不含ATP，在細(xì)胞溶解物或提取物中測(cè)得的ATP濃度與細(xì)胞數(shù)之間存在嚴(yán)格的線(xiàn)性關(guān)系。利用熒光素酶luciferase及其底物熒光素luciferin的ATP檢測(cè)以生物發(fā)光為基礎(chǔ)，能夠?yàn)槟峁┓浅ｌ`敏的結(jié)果。如果有ATP存在熒光素酶就會(huì)發(fā)光，而且其發(fā)光強(qiáng)度與ATP濃度成正比，用能讀取發(fā)光信號(hào)的光度計(jì)和酶標(biāo)儀都可以方便的進(jìn)行檢測(cè)。這種方法非常適用于高通量細(xì)胞增殖檢測(cè)和篩選。
會(huì)員1.png)