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集落刺激因子（CSF）

閱讀：589發(fā)布時間：2012-12-19

　　骨髓造血干細(xì)胞體外半固體培養(yǎng)技術(shù)的建立和重組集落刺激因子（colony-stimulatingfactor,CSF）的問世給集落刺激因子的研究提供了前提。根據(jù)細(xì)胞因子刺激不同造血細(xì)胞系或不同分化階段的細(xì)胞在半固體培養(yǎng)基中形成不同細(xì)胞集落，分別命名為粒細(xì)胞CSF（G-CSF）、巨噬細(xì)胞CSF（M-CSF）、粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞CSF（GM-CSF）、多重集落刺激因子（multi-CSF,又稱IL-3）、干細(xì)胞因子（SCF）、紅細(xì)胞生成素（EPO）。有人將IL-5稱為嗜酸性粒細(xì)胞集落刺激因子（Eo-CSF）。此外，IL-1、IL-6和IL-11在骨髓多能干細(xì)胞早期的分化中也有重要的作用。
　　
　　1981年Ihle等發(fā)現(xiàn)ConA刺激小鼠脾細(xì)胞的培養(yǎng)上清中含有一種因子，能提高裸鼠脾臟淋巴細(xì)胞成熟淋巴細(xì)胞標(biāo)志20-α-羥固醇脫氫酸（20-α-hydroxysterioddehydrogenase,20αSDH）的陽性率，命名為白細(xì)胞介素3（interleukin-3,IL-3）。由于IL-3可刺激多能干細(xì)胞和多種祖細(xì)胞的增殖與分化，又稱為多重集落刺激因子（multi-colonystimulatingfactor,multi-CSF）。
　　
　　1.IL-3的產(chǎn)生主要由活化T細(xì)胞或T細(xì)胞克隆產(chǎn)生。小鼠髓樣單核細(xì)系（myelomonocyticcellline）WEHI-3B細(xì)胞系可自發(fā)產(chǎn)生一定水平的IL-3。此外，胸腺上皮細(xì)胞、活化小鼠肥大細(xì)胞等也可表達(dá)IL-3。
　　
　　2.IL-3的分子結(jié)構(gòu)和基因1984年美國和澳大利亞分別從ConA刺激小鼠T細(xì)胞和WEHI-3B細(xì)胞中提取高活性部分mRNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，進(jìn)行克隆化和DNA序列分析。編碼小鼠IL-3和GM-CSF的基因都定位于第11號染色體。IL-3的基因組由5個外顯子和4個內(nèi)含子組成。cDNA編碼166氨基酸殘基，N端26氨基酸殘基為信號肽，此外N端另有數(shù)個氨基酸殘基可能被血清蛋白酶所切除。成熟小鼠IL-3由131氨基酸殘基組成，含有糖基，分子量為25～28kDa。
　　
　　1986年美籍華人楊育中從長臂猿T白血病細(xì)胞株MLA144中提取IL-3mRNA，成功地獲得長臂猿IL-3cDNA（gIL-3cDNA）,后又用gIL-3cDNA作為探針篩選人IL-3基因組DNA，并克隆成功。人IL-3基因結(jié)構(gòu)與小鼠相似，由5個顯子和4個內(nèi)含子組成，人與鼠IL-3DNA約有45%同源性，氨基酸有29%同源性，但人鼠間IL-3生物學(xué)作用無交叉反應(yīng)。集落刺激因子人和長臂猿IL-3有高度同源性，成熟的IL-3分子都由133個氨基酸殘基組成，僅11個氨基酸殘基不同，在第16位和84位上2個半*殘基在分子內(nèi)形成二硫鍵，此外還有2個N糖基化點。在體外糖基不影響IL-3的生物學(xué)活性。hIL-3啟動子上游調(diào)控區(qū)含有多個轉(zhuǎn)錄調(diào)控子同源位點，其中AP-1（TGAGTCA）位于-301處，CREB（TTACGTCT）位于-147處，NFAT-1（GATGAATAAT）位于-156處，CK-1（GAAGGTTCCA）位于-126處，CK-2（TCAGATAA）位于-115處。hIL-3轉(zhuǎn)錄調(diào)控主要受上游兩個順式調(diào)控區(qū)的調(diào)控。*個位于-121到-161之間，它對于hIL-3轉(zhuǎn)錄激活zui為重要，其間除含有CREB、NFAT-1外，新發(fā)現(xiàn)了對hIL-3表達(dá)起決定作用的轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白結(jié)合位點，該位點被命名為NF-IL-3-A（ATGAATAA）。第二個調(diào)控區(qū)位于-301處的AP-1位點，AP-1位點能強(qiáng)有力地增強(qiáng)hIL-3基因的轉(zhuǎn)錄。此外，zui近還發(fā)現(xiàn)了hIL-3轉(zhuǎn)錄抑制調(diào)控區(qū)，位于-250和-271之間，稱為NIP位點。目前認(rèn)為位于其上游-301處AP-1對hIL-3的轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)作用是通過消除NIP對hIL-3基因轉(zhuǎn)錄的抑制來實現(xiàn)的。

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