ELISA試驗(yàn)是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中?；厥章适欠磻?yīng)待測物在樣品分析過程中的損失的程度，損失越少，回收率越高，如果作標(biāo)液1PPM，就是1毫克/升，而作出標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)為0.99毫克/升，就是說你的回收率是99％，這個(gè)與真實(shí)成分有密切的關(guān)系，說明方法的準(zhǔn)確度。比如水中總無機(jī)氯含量測定, 樣品水中含有無機(jī)氯 20 mg/L, 取 100mL 被測水樣品, 加入 0.1mL 濃度為 10mg/mL 的含無機(jī)氯標(biāo)準(zhǔn)樣品, 測定時(shí)忽略體積變化, 如果測定出樣品中無機(jī)氯為 2.98mg/L, 則認(rèn)為回收率為 98%，不知道這樣解釋樓主是否明白了。對(duì)于定量檢測來說，主要還是一個(gè)準(zhǔn)確度的驗(yàn)證。不過我看到別人寫的內(nèi)容比我自己想說的要好，所以就貼上去了。相對(duì)回收率可能會(huì)高于*的，如果只是說“損失程度”，其實(shí)是不準(zhǔn)確的。應(yīng)該說，回收率越接近*，說明這個(gè)試劑盒的準(zhǔn)確度越高。
在ELISA中一般有3次加樣步聚，即加標(biāo)本，加酶結(jié)合物，加底物。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下倒置混和，不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩。ELISA試劑盒制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑，而血清標(biāo)本只要待血清天然凝固、血塊收縮后即可取得。也可在板孔中加入稀釋液，再在其加入血清標(biāo)本，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。
目前臨床上使用血清標(biāo)本測定的標(biāo)志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物、激素、特種蛋白、細(xì)胞因子和治療藥物等。用于傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物和特種蛋白等的檢測的血清標(biāo)本的收集則沒有時(shí)間和體位方面的影響，用于ELISA試劑盒測定的臨床標(biāo)本zui為常用的是血清（漿），有時(shí)由于特定的檢測目的，也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標(biāo)本。對(duì)用于激素和治療藥物測定的血清標(biāo)本的收集，要留意收集時(shí)間甚或體位有可能會(huì)對(duì)測定結(jié)果產(chǎn)生影響。再如治療藥物的檢測，應(yīng)根據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)選擇服藥后的zui適時(shí)間抽血檢測。又如當(dāng)從臥位變?yōu)檎玖⑽粫r(shí)，血清中腎素活性將泛起顯著增高。如可的松在早晨4～6點(diǎn)之間，會(huì)有一峰值泛起：生長激素、促黃體激素（LH）和促卵泡激素（FSH）均以陣發(fā)性方式開釋，因此，在測定此類激素時(shí)，有必要在緊密親密相連的時(shí)間距離內(nèi)采取數(shù)份血樣本，以其中間值為測定值。只是在處理和保存方面要考慮以下幾個(gè)方面：
首先要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有類似過氧化物的活性，因此，在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。血清標(biāo)本如是以無菌操作分離，則可以在2～8 ℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存。ELISA試劑盒樣本的長時(shí)間保存，應(yīng)在-70 ℃以下。樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染，一則細(xì)菌的生長，其所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用；二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時(shí)，應(yīng)離心沉淀后取上清檢測。冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果。此外，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意，不要進(jìn)行劇烈振蕩，反復(fù)顛倒混勻即可。
會(huì)員1.png)