人紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法：
1)目測(cè)定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀(guān)察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照；與陰性對(duì)照的顏色接近者，判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2～3SD，作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P／N值(陽(yáng)性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽(yáng)性；P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑；P／N小于1．5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給客戶(hù)帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。

31814 白花前胡丁素  Praeruptorin D   C24H26O7  426.4624 20mg
31815 紫花前胡苷 Nodakenin 495-31-8 C20H24O9 408.4 20mg
31816 歐前胡素 Imperatorin 482-44-0 C16H14O4 270.28 20mg
31817 異歐前胡素 Isoimperatorin 482-45-1 C16H14O4 270.28 20mg
31818 杯莧甾酮 Cyasterone 17086-76-9 C29H44O8 520.65 20mg
31819 β-蛻皮激素 Hydroxyecdysone 5289-74-7 C27H44O7 480.63 20mg
31820 表兒茶素 L-Epicatechin  490-46-0 C15H14O6 290.27 20mg
31821 表沒(méi)食子兒茶素 (-)-Epigallocatechin 970-74-1 C15H14O7 306.27 20mg
31822 表兒茶素沒(méi)食子酸酯 (-)-Epicatechin gallate 1257-08-5 C22H18O10 442.37 20mg
31823 表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯 (-)-Epigallocatechin gallate 989-51-5 C22H18O11 458.37 20mg
31824 兒茶素 Cianidanol 154-23-4 C15H14O6 290.27 20mg
31825 沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯  (-)-Gallocatechin gallate  4233-96-9 C22H18O11 458.37 20mg
31826 沒(méi)食子兒茶素 (-)-Gallocatechin 3371-27-5 C15H14O7 306.27 20mg
31827 茶多酚（UV98%） Tea polyphenol 84650-60-2 C17H19N3O 281.36 20mg
31828 茶氨酸 L-Theanine 3081-61-6 C7H14N2O3 174.2 20mg
31829 *  Theophylline 58-55-9 C7H8N4O2 180.16 50mg
31830 原兒茶酸 3,4-Dihydroxybenzoic acid 99-50-3 C7H6O4 154.12 20mg
31831 原兒茶醛 Protocatechualdehyde 139-85-5 C7H6O3 138.12 20mg
31832 苯甲酰芍藥苷 Benzoylpaeoniflorin 38642-49-8 C30H32O12 584.571 20mg
31833 羥基芍藥苷 Oxypaeoniflorin 39011-91-1 C23H28O12 496.462 20mg
31834 芍藥苷 Paeoniflorin 23180-57-6 C23H28O11 480.46 20mg
31835 芍藥內(nèi)酯苷 Albiflorin 39011-90-0 C23H28O11 480.46 20mg
31836 丹皮酚 Paeonol 552-41-0 C9H10O3 166.17 20mg
31837 濱蒿內(nèi)酯 Scoparone 120-08-1 C11H10O4 206.19 20mg
31838 東莨菪內(nèi)酯 Scopoletin 92-61-5 C10H8O4 192.17 20mg
31839 二氫香豆素 Hydrocoumarin 119-84-6 C9H8O2 148.16 20mg
31840 7-羥基-4-甲基香豆素 4-Methylumbelliferone 90-33-5 C10H8O3 176.17 20mg
31841 * 7,8-Dihydroxycoumarin 486-35-1  C9H6O4 178.14 20mg
31842 傘形花內(nèi)酯 7-Hydroxycoumarin 93-35-6 C9H6O3 162.14 20mg
31843 香豆素  Coumarin  91-64-5 C9H6O2 146.14 20mg
31844 * Norcantharidin 5442-12-6 C8H8O4 168.15 20mg
31845 斑蝥素 Cantharidin 56-25-7 C10H12O4 196.2 20mg
31846 畢靈堿 (+)-Bicuculline 485-49-4 C20H17NO6 367.35 20mg
31847 白頭翁皂苷B4 Anemoside B4 129741-57-7 C59H96O26 1221.38 20mg
31848 白頭翁素 Anemonin 90921-11-2 C10H8O4 192.17 10mg
31849 蝙蝠葛蘇林堿 daurisoline 70553-76-3 C37H42N2O6 610.747 10mg
31850 蝙蝠葛堿 Dauricine 524-17-4 C38H44N2O6 624.774 20mg
31851 蝙蝠葛氰苷 Menisdaurin 67765-58-6
C14H19NO7 313.13
10mg
31852 蝙蝠葛新諾林堿 Dauricinoline 30984-80-6 C37H42N2O6 610.747 10mg
31853 N,N’-二甲基蝙蝠葛堿碘化物  N,N’-dimethyldauricine iodide  C40H50N2O62+·2I-
908.64
10mg
31854 乙酰蝙蝠葛蘇林堿 O-diacetyldaurisoline  C41H46N2O8 694.82 10mg
31855 白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ Atractylenolide 1 73069-13-3 C15H18O2 230.3 20mg
31856 白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ Atractylenolide II 73069-14-4 C15H20O2 232.32 20mg
31857 白術(shù)內(nèi)酯III Atractylenolide III 73030-71-4 C15H20O3 248.32 20mg
31858 蒼術(shù)素 Atractylodin 55290-63-6 C13H10O 182.22 20mg
31859 蒼術(shù)苷A Atractyloside A 126054-77-1 C21H36O10 448.5 20mg
31860 茅蒼術(shù)醇  Hinesol 23811-08-7 C15H26O 222.37 10mg
31861 白鮮堿 Dictamnine 484-29-7 C12H9NO2 199.21 10mg
31862 百秋李醇（氣相97%） Patchouli alcohol 5986-55-0 C15H26O 222.37 20mg
31863 白屈菜紅堿 Chelerythrine  34316-15-9 C21H18NO4+ 348.37192 20mg
31864 鹽酸白屈菜紅堿 Chelerythrine chloride 3895-92-9 C21H18ClNO4 383.82 20mg
31865 白蠟樹(shù)素 Dimethylfraxetin 6035-49-0 C12H12O5 236.22 10mg
31866 百蕊草素I Kaempeerol-3-O-glucorhamnoside 40437-72-7 C27H30O15 594.52 20mg
31867 表木栓醇 Friedelan-3beta-ol 16844-71-6 C30H52O 428.73 10mg
31868 扁蓄苷 avicularin 572-30-5 C20H18O11 434.35 20mg
31869 貝萼皂苷元 Bayogenin 6989-24-8 C30H48O5 488.7 20mg
31870 別隱品堿 Allocryptopine 485-91-6 C21H23NO5 369.41 20mg
31871 人紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA試劑盒巴西蘇木素 Brazilin
474-07-7 C16H14O5 286.28 10mg
31872 蘇木素 Hematoxylin 517-28-2 C16H14O6 302.28 20mg
31873 原蘇木素B Protosappanin B 102036-29-3  C16H16O6 304.09 10mg

下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：
1 選擇試劑：選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣：可能原因： 
1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 
2）手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法： 
1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。 
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 
5) 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。
3 孵育：可能原因： 
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周?chē)y以清洗*。解決辦法： 
1) 貼封片或加蓋； 
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板：可能原因： 
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法： 
1) 保證洗液注滿(mǎn)各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 
2) 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA試劑盒顯色：可能原因： 
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑； 
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 
1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑，肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流； 
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止：可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板：如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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