特殊染色技術(shù)的應(yīng)用

現(xiàn)代病理學(xué)中免疫組織化學(xué)技術(shù)、電子顯微鏡技術(shù)以及其它細(xì)胞及分子生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用日益廣泛， 這些技術(shù)要求一定的實(shí)驗(yàn)條件和試劑，如市面上使用廣泛的徠卡染色機(jī)及其配套的徠卡透明試劑。相對而言，組織化學(xué)技術(shù)則具有無需復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)條件和試劑、操作又比較簡單的優(yōu)勢，在臨床病理學(xué)診斷中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

組織化學(xué)染色的方法很多，這里僅介紹幾種常用的組織化學(xué)染色在病理診斷中的應(yīng)用。

一、膠原纖維的染色

凡是間葉組織細(xì)胞都可產(chǎn)生網(wǎng)織纖維，也可產(chǎn)生膠原纖維，纖維母細(xì)胞是產(chǎn)生膠原纖維的主要細(xì)胞。膠原纖維是結(jié)締組織中的主要纖維，是結(jié)締組織中起支持作用的重要部分，具有一定的韌性和堅(jiān)固性，能抵抗一定的牽引力而不致撕裂。膠原纖維是原膠原互相錯(cuò)開1/4平行排列交聯(lián)成膠原原纖維，膠原原纖維再聚合成較寬的結(jié)構(gòu)。按膠原的化學(xué)成分可分為15種，間質(zhì)中的膠原纖維主要由I、Ⅱ、Ⅲ型膠原組成，新鮮時(shí)呈白色，故又稱為白纖維。在HE染色中呈均一的粉紅色，與周圍間質(zhì)區(qū)分不是很清楚。用染色液進(jìn)行染色后，便可明顯區(qū)別開來，易于觀察病變時(shí)膠原纖維的變化。

應(yīng)用：

(1)器官硬化性疾病的觀察：如肝硬變、心肌瘢痕的觀察，膠原染色更易于觀察診斷。

(2)瘢痕與淀粉樣物質(zhì)鑒別：前者膠原纖維染色為陽性，后者為陰性。

(3)骨纖維異常增殖病與骨纖維化的鑒別：利用膠原纖維染色可較易觀察前者膠原纖維紊亂，縱橫交錯(cuò)，后者較規(guī)則。

二、彈力纖維染色

彈力纖維是結(jié)締組織發(fā)生形成較晚的一種纖維，在創(chuàng)傷修復(fù)中一般在4——5周才有較明顯的彈力纖維形成。彈力纖維艱固、較小而彈性較大，容易伸展，在結(jié)締組織起彈性作用。彈力纖維由彈性蛋白組成，新鮮時(shí)呈黃色又稱黃纖維。彈力纖維纖維分枝連成網(wǎng)，折光性強(qiáng)，含量多時(shí)在HE染片上呈折光性強(qiáng)的粉紅色，量少的不顯色。故量多時(shí)與膠原纖維不易區(qū)別，量少則不能觀察。彈力纖維染色主要用于觀察彈力纖維有無增生、腫脹、斷裂、破碎及萎wei縮或缺如等病變。

應(yīng)用：

(1）動靜脈的辨認(rèn)：在血管病變時(shí)是動脈還是靜脈以及是否為血管壁難辨認(rèn)時(shí)，彈力纖維染色有助于辨認(rèn)。有彈力板者為動脈，有彈力纖維構(gòu)成血管輪廓者為血管。彈力纖維抗損傷能力較強(qiáng)，故彈力性纖維構(gòu)成血管輪廓不易損壞。

（2）心血管先天性彈力組織增生，這組疾病有先天性內(nèi)膜炎及冠狀動脈的彈力纖維組織增生。彈力纖維染色有助于診斷。

（3）彈力纖維損傷性疾病：這組疾病有肺氣腫、動脈粥樣硬化、大動脈中層炎癥等，彈力纖維染色有助于這些疾病的觀察診斷。

（4）一些與彈力纖維變化有關(guān)的皮膚疾病的診斷與鑒別診斷：這組疾病有皮膚松馳癥，萎wei縮性硬化性苔蘚等，其診斷與鑒別診斷常依賴于彈力纖維染色，以觀察彈力纖維變化。

三、色素染色（含鐵血黃素及黑色素）

含鐵血黃素是由漏出于血管外的紅細(xì)胞，被巨噬細(xì)胞吞噬后，分解血紅蛋白產(chǎn)生的顆粒，HE染色為棕黃色，故稱為含鐵血黃素。因有時(shí)與福爾馬林沉渣及黑色素等難相區(qū)別，故做含鐵血黃素染色。

應(yīng)用：

主要用于同其它色素鑒別，若為陽性，顯示陳舊性出血。

黑色素常見于皮膚色素細(xì)胞，惡性黑色素瘤常可產(chǎn)生黑色素。組織內(nèi)大量存在時(shí)呈棕黑色，易于鑒別。但少量存在時(shí)便難與其它色素相鑒別，須作黑色素染色。

應(yīng)用：

（1）黑色素瘤的診斷與鑒別診斷：腫瘤細(xì)胞內(nèi)色素是否為黑色素，染黑色素有助于確定黑色素性質(zhì)及腫瘤的定性診斷。

（2）血色病與黑便病：真皮內(nèi)有色素沉著，黑色素陰性而含鐵血黃素陽性者可能為前者。

特殊染色的基本信息

為了顯示與確定組織或細(xì)胞中的正常結(jié)構(gòu)或病理過程中出現(xiàn)的異常物質(zhì)、病變及病原體等，需要分別選用相應(yīng)的顯示這些成分的染色方法進(jìn)行染色。包括：膠原纖維染色（Masson等）、網(wǎng)狀纖維染色、彈力纖維染色、肌肉組織染色（磷鎢酸蘇木素）、脂肪染色（蘇丹III）、糖原染色（PAS）、粘液染色（PAS）等。

Masson三色染色：膠原纖維藍(lán)色（苯胺藍(lán)復(fù)染）或綠色（亮綠復(fù)染），肌纖維、纖維素紅色，紅細(xì)胞呈橘紅色。

特殊染色的注意事項(xiàng)

1、染色前：

①切出的石蠟切片要好，不能有皺褶或者刀痕，切片不能太厚。

②撈片時(shí)，最好一張玻片撈一個(gè)組織，組織最好位于玻片的中間，美觀的同時(shí)也利于脫蠟（有時(shí)二甲苯的液面低于組織片的時(shí)候，達(dá)不到脫蠟的目的）。

③石蠟切片脫蠟到水時(shí)，一定要注意組織切片脫蠟務(wù)必要徹di底（脫蠟時(shí)間不能太少）以使脫蠟后的組織達(dá)到真正的“干凈”。否則剩余的未脫干凈的石蠟粘附在組織表面，在染色時(shí)染色液未能充分與組織接觸，最終導(dǎo)致染色效果不佳，甚至染不上顏色。

④在染色過程中最好不要在玻片上貼標(biāo)簽紙，以避免脫蠟時(shí)把標(biāo)簽紙也浸沒，致使標(biāo)簽紙上的膠黏到玻片上，造成染色不佳。

⑤在染色前，用有色鉛筆在組織周圍劃一個(gè)圈，這樣在滴加染液時(shí)就不會使染液溢出。

2、染色時(shí)：

①染色時(shí)必須嚴(yán)格按照染色操作說明書進(jìn)行染色。

②在染色過程中，前一個(gè)染液浸染完成后，在進(jìn)行下一個(gè)染液的步驟之前，必須徹di底充分水洗，使前一個(gè)染液沖洗干凈后再進(jìn)行下一步驟。

③ 每次滴加染液前，務(wù)必吸干組織上多余的水分，避免多余的水把染液稀釋了，造成染色不佳。

④在滴加染液時(shí)，務(wù)必使染液完wan全覆蓋組織，但不能溢出圈外，避免浪費(fèi)試劑。