培養(yǎng)基平皿生產(chǎn)與質(zhì)量控制
上一章節(jié)介紹了成品預(yù)裝培養(yǎng)基平皿的質(zhì)量要求，那么我們?nèi)绾文艿玫椒项A(yù)期質(zhì)量要求的成品預(yù)裝培養(yǎng)基平皿呢？
首先了解一下簡(jiǎn)化的培養(yǎng)基平皿生產(chǎn)工藝。
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配制：在制備培養(yǎng)基時(shí)，準(zhǔn)確稱量質(zhì)量符合要求的脫水培養(yǎng)基或按單獨(dú)配方組分進(jìn)行配制，待脫水培養(yǎng)基或按單獨(dú)配方組分溶解后定容、調(diào)節(jié)PH值，再進(jìn)行升溫滅菌。應(yīng)記錄各稱量物的重量和水的使用量。
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滅菌：培養(yǎng)基配制結(jié)束后，選擇經(jīng)過驗(yàn)證的滅菌程序，立即快速升溫至滅菌溫度進(jìn)行滅菌，滅菌結(jié)束后必須快速冷卻到可分裝溫度。在工序中，溫度對(duì)培養(yǎng)基的質(zhì)量影響非常敏感，所以要根據(jù)滅菌培養(yǎng)基的特性，進(jìn)行全面的滅菌程序驗(yàn)證，以保證在一定裝載方式下的正常熱分布。
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分裝：將經(jīng)滅菌、冷卻后的培養(yǎng)基分裝到無菌空皿中。在該工序中應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡，裝量均一、穩(wěn)定，固體培養(yǎng)基表面不得產(chǎn)生裂縫或漣漪、不破損。分裝后冷卻過程應(yīng)有層流保護(hù)，不得污染微生物。
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包裝：分裝好的培養(yǎng)皿要及時(shí)包裝，用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基須特別防護(hù)，需雙層包裝，若是用于區(qū)環(huán)境監(jiān)測(cè)的培養(yǎng)基平皿，建議三層無菌包裝。
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終端滅菌：將包裝后培養(yǎng)基平皿進(jìn)行滅菌，確保其無菌性。特別是用于環(huán)境監(jiān)測(cè)的培養(yǎng)基平皿，《中國(guó)藥典（2015版）》9203中明確規(guī)定“用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基須特別防護(hù)，最好要雙層包裝和終端滅菌"。
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檢驗(yàn)放行：培養(yǎng)基平皿生產(chǎn)結(jié)束后，在使用前必須對(duì)每一批次取樣檢驗(yàn)。檢驗(yàn)項(xiàng)目包括外觀、裝量、PH值、無菌性、微生物促生長(zhǎng)試驗(yàn)，確保在潔凈區(qū)使用的培養(yǎng)基平皿是符合預(yù)期質(zhì)量要求的產(chǎn)品。
培養(yǎng)基平皿生產(chǎn)工藝中工序并不多，但是在很多微生物實(shí)驗(yàn)室自制用于環(huán)境監(jiān)測(cè)的培養(yǎng)皿的過程中，比較容易忽略一些工序細(xì)節(jié)，例如使用單層包裝、非最終滅菌等。在使用前采取100%預(yù)培養(yǎng)雖然避免了“假陽性"，但同時(shí)還帶來了“假陰性"和培養(yǎng)基平皿因包裝保護(hù)不當(dāng)而帶來的交叉污染。
正因?yàn)榕囵B(yǎng)基生產(chǎn)工序不多，一些院校微生物實(shí)驗(yàn)室和部分制藥企業(yè)微生物實(shí)驗(yàn)室所使用的培養(yǎng)基平皿還是根據(jù)培養(yǎng)基各組分自配自用，也有部分是使用按處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基進(jìn)行自行配制使用。但是根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》通則9203“藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則"中培養(yǎng)基制備的要求，手工配制培養(yǎng)基平皿難以滿足潔凈區(qū)環(huán)境監(jiān)測(cè)的需要，所以在法規(guī)嚴(yán)格要求及質(zhì)量意識(shí)普遍提高的時(shí)代背景下，用于潔凈區(qū)環(huán)境監(jiān)測(cè)的培養(yǎng)基平皿基本上是采用商品化的成品預(yù)裝培養(yǎng)基平皿。
每個(gè)產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝都具有性，成品預(yù)裝培養(yǎng)基平皿也如此，但是培養(yǎng)基的質(zhì)量控制方面，有著共同的關(guān)鍵因素，如人員、培養(yǎng)基、菌種、驗(yàn)證、設(shè)備、文件等。
人員
人員是生產(chǎn)活動(dòng)中最關(guān)鍵的要素，既要管理物料、操控設(shè)備，又要制訂規(guī)程、治理環(huán)境，生產(chǎn)的每道工序都是靠人來把控。
人員應(yīng)依據(jù)所在崗位和職責(zé)接受相應(yīng)的培訓(xùn)，如在上崗前接受勝任工作所必需的設(shè)備操作、微生物檢驗(yàn)技術(shù)等方面的培訓(xùn)，包括無菌操作、培養(yǎng)基制備、消毒、滅菌、平皿分裝、菌落計(jì)數(shù)、菌種的轉(zhuǎn)種、傳代和保藏、微生物檢查方法等，經(jīng)考核合格后方可上崗。
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基作為成品培養(yǎng)平皿的原料，是微生物試驗(yàn)的基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗(yàn)結(jié)果。適宜的貯藏條件和質(zhì)量控制試驗(yàn)是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證。所以在投產(chǎn)前必須要檢驗(yàn)脫水培養(yǎng)基質(zhì)量，如PH值、微生物促生長(zhǎng)試驗(yàn)等，這也是確保培養(yǎng)基平皿符合質(zhì)量要求的首要條件。
菌種
根據(jù)《中國(guó)藥典》要求，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該有標(biāo)準(zhǔn)化的菌種處理和保藏的程序，盡可能減少菌種污染和生長(zhǎng)特性的改變。規(guī)范操作程序制備的菌株是微生物試驗(yàn)結(jié)果一致性的重要保證。
標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)蘇、復(fù)壯或培養(yǎng)物的制備應(yīng)按供應(yīng)商提供的說明或按已驗(yàn)證的方法進(jìn)行。從國(guó)內(nèi)或國(guó)外菌種保藏機(jī)構(gòu)獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)過復(fù)活并在適宜的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)后，即為標(biāo)準(zhǔn)貯備菌株。標(biāo)準(zhǔn)貯備菌株應(yīng)進(jìn)行純度和特性確認(rèn)。標(biāo)準(zhǔn)貯備菌株保存時(shí)，可將培養(yǎng)物等份懸浮于抗冷凍的培養(yǎng)基中，并分裝于小瓶中，建議采用低溫冷凍干燥、液氮貯存、超低溫冷凍（低于-30℃）等方法保存。低于-70℃或低溫冷凍干燥方法可以延長(zhǎng)菌種保存時(shí)間。標(biāo)準(zhǔn)貯備菌株可用于制備每月或每周1次轉(zhuǎn)種的工作菌株。冷凍菌種一旦解凍轉(zhuǎn)種制備工作菌株后，不得重新冷凍和再次使用。
工作菌株的傳代次數(shù)應(yīng)嚴(yán)格控制，不得超過5代（從菌種保藏機(jī)構(gòu)獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株為第0代），以防止過度的傳代增加菌種變異的風(fēng)險(xiǎn)。1代是指將活的培養(yǎng)物接種到微生物生長(zhǎng)的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)，任何形式的轉(zhuǎn)種均被認(rèn)為是傳代1次。必要時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)工作菌株的特性和純度進(jìn)行確認(rèn)。
工作菌株不可替代標(biāo)準(zhǔn)菌株，標(biāo)準(zhǔn)菌株的商業(yè)衍生物僅可用作工作菌株。標(biāo)準(zhǔn)菌株如果經(jīng)過確認(rèn)試驗(yàn)證明已經(jīng)老化、退化、變異、污染等或該菌株已無使用需要時(shí)，應(yīng)及時(shí)滅菌銷毀。
實(shí)驗(yàn)室必須建立和保存其所有菌種的進(jìn)出、收集、貯藏、確認(rèn)試驗(yàn)以及銷毀的記錄，應(yīng)有菌種管理的程序文件（從標(biāo)準(zhǔn)菌株到工作菌株），該程序包括：標(biāo)準(zhǔn)菌種的申購(gòu)記錄；從標(biāo)準(zhǔn)菌株到工作菌株操作及記錄；菌種必須定期轉(zhuǎn)種傳代，并做純度、特性等實(shí)驗(yàn)室所需關(guān)鍵指標(biāo)的確認(rèn)，并記錄；每支菌種都應(yīng)注明其名稱、標(biāo)準(zhǔn)號(hào)、接種日期、傳代數(shù)；菌種生長(zhǎng)的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件；菌種保藏的位置和條件；其他需要的程序。
驗(yàn)證
無論是自行制備還是商品化生產(chǎn)成品預(yù)裝培養(yǎng)基平皿，首先都必須要有滅菌程序的驗(yàn)證，即培養(yǎng)基應(yīng)采用通過驗(yàn)證的滅菌程序進(jìn)行滅菌，培養(yǎng)基滅菌方法和條件，應(yīng)通過無菌性試驗(yàn)和促生長(zhǎng)試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。其次對(duì)高壓滅菌器的蒸汽循環(huán)系統(tǒng)也要加以驗(yàn)證，以保證在一定裝載方式下的正常熱分布。第三，瓊脂平板最好現(xiàn)配現(xiàn)用，如置冰箱保存，一般不超過1周，且應(yīng)密閉包裝，若延長(zhǎng)保存期限，保存期需經(jīng)驗(yàn)證確定，即產(chǎn)品的穩(wěn)定性考察。第四，產(chǎn)品的工藝驗(yàn)證。在實(shí)驗(yàn)室中，若采用已驗(yàn)證的配制和滅菌程序制備培養(yǎng)基且過程受控，那么同一批脫水培養(yǎng)基的適用性檢查試驗(yàn)可只進(jìn)行1次。如果培養(yǎng)基的制備過程未經(jīng)驗(yàn)證，那么每一滅菌批培養(yǎng)基均要進(jìn)行適用性檢查試驗(yàn)。
設(shè)備
微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備與檢驗(yàn)?zāi)芰凸ぷ髁肯噙m應(yīng)的儀器設(shè)備，其類型、測(cè)量范圍和準(zhǔn)確度等級(jí)應(yīng)滿足檢驗(yàn)所采用標(biāo)準(zhǔn)的要求。設(shè)備的安裝和布局應(yīng)便于操作，易于維護(hù)、清潔和校準(zhǔn)，并保持清潔和良好的工作狀態(tài)。用于試驗(yàn)的每臺(tái)儀器、設(shè)備應(yīng)該有標(biāo)識(shí)。
儀器設(shè)備應(yīng)有合格證書，實(shí)驗(yàn)室在儀器設(shè)備完成相應(yīng)的檢定、校準(zhǔn)、驗(yàn)證、確認(rèn)其性能，并形成相應(yīng)的操作、維護(hù)和保養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程后方可正式使用，儀器設(shè)備使用和日常監(jiān)控要有記錄。
文件
對(duì)實(shí)驗(yàn)室自行配制培養(yǎng)皿而言，文件應(yīng)當(dāng)充分表明試驗(yàn)是在實(shí)驗(yàn)室里按可控的檢查法進(jìn)行的，一般包括以下方面：人員培訓(xùn)與資格確認(rèn)；設(shè)備驗(yàn)收、驗(yàn)證、檢定（或校準(zhǔn)期間核查）和維修；設(shè)備使用中的運(yùn)行狀態(tài)（設(shè)備的關(guān)鍵參數(shù)）；培養(yǎng)基制備、貯藏和質(zhì)量控制；菌種管理；檢驗(yàn)規(guī)程中的關(guān)鍵步驟；數(shù)據(jù)記錄與結(jié)果計(jì)算的確認(rèn)；數(shù)據(jù)偏離的調(diào)査。
由于培養(yǎng)基平皿作為醫(yī)療器械類產(chǎn)品，其生產(chǎn)企業(yè)必須嚴(yán)格按照《醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》來制訂相關(guān)指導(dǎo)文件指導(dǎo)生產(chǎn)，如工藝規(guī)程、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、各操作規(guī)程等。
總之，成品預(yù)裝培養(yǎng)基平皿的質(zhì)量是生產(chǎn)出來的，所以在生產(chǎn)過程中要嚴(yán)格控制生產(chǎn)工序中每一個(gè)環(huán)節(jié)，著眼于整個(gè)質(zhì)量體系，比如人員的規(guī)范操作、物料的質(zhì)量控制、嚴(yán)格規(guī)范的生產(chǎn)過程、科學(xué)的質(zhì)量控制等。
