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當(dāng)前位置:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司>>公司動態(tài)>>薄層層析法的簡介和制備過程
一、簡介
薄層層析法以吸附層析使用最為普遍。常用的吸附劑為硅膠、氧化鋁等。薄層層析和其他層析法一樣,除吸附法外,也可進(jìn)行分配、離子交換、分子排阻等機(jī)理的層析,即將鋪制薄層的材料相應(yīng)換為涂以固定相的載體、離子交換劑、凝膠等,其操作與吸附法基本相同。
二、過程
制板
鋪制薄層板時,要求基底板潔凈平整,可用干法或濕法鋪制。現(xiàn)常用濕法制板,即將吸附劑和粘合劑(如燒石膏)按一定比例混合,加入適量水調(diào)勻,用涂布器將此勻漿緩慢地移過基底板,放置晾干,再經(jīng)適當(dāng)烘烤活化后即可使用。如不加粘合劑和水,直接將吸附劑均勻地鋪成薄層,則為干法制板。現(xiàn)在市場上已有各種制好的薄層板出售,統(tǒng)稱預(yù)制板。
展開
有多種方式,以上行法最為常用。將薄層板垂直或傾斜放置,將展開溶劑加于低部,使之自下向上移動。下行法則為用濾紙將溶劑引至薄層上端,使其自上向下流動。平行展開時,將板平放,溶劑被吸上至薄層板點有樣品的一端,進(jìn)行展開。使用圓形薄層板時,將樣品點在圓心附近,使溶劑自圓心向圓周方向移動,稱為環(huán)形展開或徑向展開;將樣品點在圓周位置,使溶劑自圓周向圓心移動的為向心展開,適用于f值大的組分的分離。將點樣品處附近的吸附劑刮去,使溶劑只能通過樣品點附近的較窄部分前進(jìn)展開,因而溶劑前緣呈弧形的展開方式,也稱徑向展開,這種方式對較難分離的組分可能效果好些。
展開一次后取出薄層板使溶劑揮發(fā),再用同一溶劑或換用其他溶劑再次沿此方向展開的稱多次展開。將樣品點在方形薄層板的一角,先沿著一個方向展開,然后將板轉(zhuǎn)動90°,再沿著另一方向展開的為雙向展開。多次展開和雙向展開都可加強(qiáng)分離效果。
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