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當(dāng)前位置:武漢艾美捷科技有限公司>>技術(shù)文章>>Nanoprobes丨EnzMet 用于免疫組織化學(xué)和印跡
艾美捷 Nanoprobes EnzMet 不僅僅用于原位雜交的光學(xué)檢測(cè)。它對(duì)于生物芯片上的 DNA的電檢測(cè)也非常有效,在使用電J陣列對(duì)目標(biāo) DNA 進(jìn)行電檢測(cè)方面,它提供了優(yōu)于銀增強(qiáng)膠體金的改進(jìn)。現(xiàn)在,在他們最近的生物傳感器和生物電子學(xué)論文中、Schüler、Fritzsche 和同事證明,該過程可用于絲網(wǎng)印刷電J結(jié)構(gòu),用于基于芯片的病毒 DNA 電檢測(cè)(人類 CMV DNA 的 150 bp PCR 產(chǎn)物)。這些電J陣列是在玻璃基板上生產(chǎn)的,從而可以進(jìn)行額外的光學(xué)讀出。絲網(wǎng)印刷結(jié)構(gòu)顯示出所需的精度,并與應(yīng)用的生化協(xié)議兼容。與標(biāo)準(zhǔn)光刻法生產(chǎn)的芯片基板相比,絲網(wǎng)印刷芯片表現(xiàn)出相同的靈敏度和特異性。
因此,用于電檢測(cè)的 DNA 芯片電J陣列的絲網(wǎng)印刷為生產(chǎn)具有微結(jié)構(gòu)電J的 DNA 芯片提供了一種有趣且具有成本效益的方法。也可使用Nanoprobes的EnzMet TM HRP 檢測(cè)試劑盒用于研究應(yīng)用程序(目錄號(hào) 6010)。
參考文獻(xiàn):
Schüler T, Asmus T, Fritzsche W, M?ller R.: Screen printing as cost-efficient fabrication method for DNA-chips with electrical readout for detection of viral DNA. Biosens. Bioelectr., 24, 2077-2084 (2009).
Abstract (courtesy of Science Direct).
艾美捷 Nanoprobes EnzMet TM也是免疫組織化學(xué) (IHC) 的理想檢測(cè)和可視化方法,它可用于高度敏感的檢測(cè),具有最小的背景和非常高的印跡對(duì)比度. 使用高復(fù)雜性組織微陣列 (TMA) 測(cè)試免疫組織化學(xué)應(yīng)用。使用自動(dòng)載玻片染色系統(tǒng) (Ventana Medical Systems) 通過酶金相 (EnzMet) 評(píng)估 88 種常見實(shí)體瘤;選擇靶點(diǎn)來評(píng)估 EnzMet 在 TMA 中特異性定位細(xì)胞核(雌激素受體)、細(xì)胞質(zhì)(細(xì)胞角蛋白)和細(xì)胞質(zhì)膜 (HER2) 中編碼抗原的能力。評(píng)估的所有三種抗原的染色強(qiáng)度與乳腺腫瘤以及腎癌、結(jié)腸癌和前列腺癌相當(dāng)。
然而,與 DAB 相比,EnzMet IHC 制劑中的染色質(zhì)量要清晰得多,并且染色沉積物更清晰,顯示出更多的點(diǎn)狀外觀。EnzMet 和傳統(tǒng) IHC 結(jié)果*一致。EnzMet 反應(yīng)產(chǎn)物密集且清晰,沒有明顯擴(kuò)散,并為評(píng)估的核、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜定位抗原的石蠟切片中的細(xì)胞隔間提供了出色的高分辨率分化。在酶金相過程中沉積的元素銀的較高密度允許在相對(duì)較低的放大倍數(shù)下評(píng)估核心免疫表型,而無需油浸,從而可以有效地篩選更多組織。此外,信號(hào)穩(wěn)定并提供永丨久記錄。在酶金相過程中沉積的元素銀的較高密度允許在相對(duì)較低的放大倍數(shù)下評(píng)估核心免疫表型,而無需油浸,從而可以有效地篩選更多組織。此外,信號(hào)穩(wěn)定并提供永丨久記錄。在酶金相過程中沉積的元素銀的較高密度允許在相對(duì)較低的放大倍數(shù)下評(píng)估核心免疫表型,而無需油浸,從而可以有效地篩選更多組織。此外,信號(hào)穩(wěn)定并提供永丨久記錄。
參考文獻(xiàn):
Tubbs R.; Pettay J.; Powell R.; Hicks D. G.; Roche P.; Powell W.; Grogan T., and Hainfeld, J. F.: High-resolution immunophenotyping of subcellular compartments in tissue microarrays by enzyme me
對(duì)于免疫組織化學(xué),使用艾美捷 Nanoprobes的EnzMet EnzMet HRP 檢測(cè)試劑盒用于 IHC/ISH(目錄號(hào) 6001)。
左圖:石蠟包埋的人膀胱腫瘤中上皮細(xì)胞角蛋白的免疫過氧化物酶染色:
(a)用 DAB 進(jìn)行的繼發(fā)性免疫過氧化物酶;( b ) 使用 EnzMet TM的二級(jí)免疫過氧化物酶法(原始放大倍數(shù) x 400)。
右圖:使用 ( c ) DAB 和 ( d ) EnzMet TM開發(fā)的 HRP 偶聯(lián)物對(duì)帶有 his 標(biāo)簽的融合蛋白進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)的比較。
轉(zhuǎn)移后,將膜與抗 His-Tag (6xHis) 單克隆抗體一起孵育,然后進(jìn)行 BSA 封閉,然后暴露于偶聯(lián)辣根過氧化物酶 (HRP) 的二抗。然后通過 DAB 檢測(cè)(圖 A)或 EnzMet TM檢測(cè)(圖 B)可視化帶有 His 標(biāo)簽的融合蛋白。泳道1和4:0.1 µg 34 kDa his-tagged ATF-1。泳道2和5:0.1 µg 68 kDa his-tagged YY1。泳道3和6:0.1 µg BSA 和 0.1 µg 卵清蛋白
在大多數(shù)情況下,以下使用EnzMet TM進(jìn)行印跡的 EnzMet TM協(xié)議可以替代傳統(tǒng)的 DAB 開發(fā),而無需進(jìn)一步修改協(xié)議。然而,由于其更高的靈敏度,可能需要對(duì)一抗或二抗探針進(jìn)行更大的稀釋,以實(shí)現(xiàn)靈敏度和清晰度的最佳組合。已發(fā)現(xiàn) 5 倍至 10 倍的額外稀釋在免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生良好的結(jié)果,并且在這里也可能是合適的。
Nanoprobes專注于免疫金標(biāo)記和免疫測(cè)定試驗(yàn)領(lǐng)域,為廣大科研機(jī)構(gòu)提供用于檢測(cè)生物分子的最丨靈敏的試劑和技術(shù)。艾美捷科技是Nanoprobes的中國代理商,為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。
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