Jackson公司蛋白質電印跡方法：

有三種不同的電印跡方法：濕法、半干法和干法。在所有方法中，凝膠和膜直接接觸，確保它們之間的所有空氣都被排出。（表1）

Jackson公司：確認蛋白質轉移

蛋白質標記轉移的目視檢查可以粗略評估蛋白質轉移的效率。然而，臨時膜染色是確定蛋白質轉移的更準確的方法。Ponceau S（0.1% w/v Ponceau S，5% v/v 乙酸水溶液）是一種快速簡便的染色劑，與硝酸纖維素膜和 PVDF 膜兼容。

染色后，蛋白質顯示為紅色條帶。條帶的強度表示與膜結合的蛋白質的量，并表示印跡均勻性。

可能會干擾蛋白質轉移的氣泡顯示為空白圓圈。

Ponceau S 可以通過用去離子水洗滌去除，并且不影響蛋白質印跡的后續步驟。Ponceau S 的靈敏度低，檢測限相對較低 (250 ng)。其他蛋白質染色劑包括膠體金、印度墨水和考馬斯亮藍。然而，這些不能輕易地用水逆轉并阻礙隨后的免疫探測。

考馬斯亮藍可用于染色聚丙烯酰胺凝膠以識別任何未能轉移的蛋白質。確定蛋白質轉移是否完成對于下游分析很重要。因此，必須通過調整緩沖液成分和優化轉移時間來優化印跡過程。

Jackson公司：替代蛋白質印跡平臺

已經開發出新技術來提高生產力和靈活性。新平臺通過結合毛細管電泳、微流體和芯片實驗室微分析系統等技術來縮短分析時間、提供多路檢測并實現高通量。這些小容量設備可以處理更少量的蛋白質，需要更少量的抗體和其他試劑，并降低每次檢測的成本。更快的處理使高通量和多路復用分析成為可能。

與傳統的蛋白質印跡程序相比，一些新系統在某些情況下甚至表現出更高的靈敏度。已經開發出新技術來促進自動化，減少在傳統蛋白質印跡中觀察到的用戶錯誤的可能性，從而提供標準化的結果。然而，在這些設備普及之前仍有待改進。

毛細管電泳

毛細管電泳分離蛋白質，因為它們通過填充有聚合物基質的小毛細管遷移，該聚合物基質以類似于聚丙烯酰胺凝膠的方式阻礙它們的遷移。

蛋白質從毛細管洗脫到緩慢移動的膜上，從而解決蛋白質大小問題。然后使用傳統的蛋白質印跡法探測蛋白質。

微芯片毛細管電泳

微芯片毛細管電泳 (MCE) 也使用毛細管作用來按大小解析蛋白質。使用微芯片代替毛細管。然后將分離的蛋白質捕獲在膜上并通過免疫測定進行探測。

2016 年，金等人。與傳統的蛋白質印跡相比，使用 MCE 設備證明了更高的靈敏度和更好的分辨率。

Herr 小組進一步開發了一種使整個蛋白質印跡過程小型化的設備。光敏凝膠通過光誘導蛋白質與凝膠的交聯來捕獲分離的蛋白質，然后進行原位免疫探測。

單細胞免疫印跡

使用多層微流體裝置實現單細胞蛋白質印跡，允許分析細胞間的變化。將單個細胞置于微孔中，并通過“蓋層"添加裂解試劑。

然后聚丙烯酰胺凝膠基層使用雙向電泳分離蛋白質。該技術已被證明可實現亞細胞分辨率，并在 6 小時內處理 103 個細胞。

文獻參考：

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Jackson公司專注于親和純化的二抗和純化免疫球蛋白研究，服務領域覆蓋各大學科研所和醫院里的動物研究以及生物醫學研究機構的科學家。艾美捷科技是Jackson公司的中國代理商，為科研工作者提供優質的產品與服務。