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上海古朵生物科技有限公司

3-磷酸甘油醛脫氫酶的測(cè)定實(shí)驗(yàn)

時(shí)間:2019-3-11閱讀:739
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實(shí)驗(yàn)方法原理

GAPDH,D-磷酸甘油醛;NADP+ 氧化還原酶(磷酸化)。

 

D-3-磷酸甘油醛 + NAD? 1,3-磷酸甘油醛+ NADH + H

 

酶的實(shí)驗(yàn)既可以在正反應(yīng)方向也可以在偶聯(lián)后的逆反應(yīng)方向進(jìn)行。正反應(yīng)中,必須加入不穩(wěn)定且很昂貴的 DL-3-磷酸甘油酸。

實(shí)驗(yàn)材料

3-磷酸甘油醛脫氫酶溶液

試劑、試劑盒

三乙醇胺 · HCl DL-磷酸甘油酸 NAD+ 砷suan二氫鉀

儀器、耗材

分光光度計(jì)

實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)所需「試劑」具體見「其他」

 

0.98 ml 實(shí)驗(yàn)混合物

 

0.02 ml 酶溶液

 

在 25℃ 時(shí),于 340 nm 處吸收值降低。NADPH 的吸收系數(shù) ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。

 

其他試劑:

0.1 mol/L 三乙醇胺 · HCl/NaOH pH 7.6(三乙醇胺 · HCl,Mr=185.7;溶解 18.6 g 于 800 ml H2O 中,用 1 mol/L NaOH 調(diào)節(jié)至 pH 7.6,補(bǔ)充到 1 L)

0.3 mol/L DL-磷酸甘油酸(Mr=170.1;不穩(wěn)定,水狀溶液 50 mg/ml)

0.1 mol/L NAD+(游離酸,Mr=663.4;663 mg 溶于 10 ml 水中)

0.1 mol/L 砷suan二氫鉀(Mr=180.0;180 mg 溶于 10 ml 水中)

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