水稻葉片

液氮 CTAB lu仿 異戊醇 乙醇 NH4AC EtOH

離心管 離心機(jī)

1.  采集適量幼嫩葉片，用液N₂研成粉末，0.4 g裝入1.5 ml離心管中（-20 ℃預(yù)冷）。

2.  預(yù)熱1.5×CTAB到95 ℃，加1 ml到裝有葉片粉末的離心管中，混勻（防止凍融）。

3.  立即置于65 ℃水浴30min，每5分鐘，上下顛倒1次。

4.  12000 g離心5分鐘。

5.  吸取上清液約600 μl，加入等體積（600 μl）lu仿/異戊醇(24:1)，上下顛倒數(shù)次，至下層液相呈深綠色為止。

6.  12000 g離心5分鐘。

7.  取450 μl上清于一新1.5 ml離心管，加入1 ml 95%乙醇和45 μl 10 M NH₄AC），混勻，室溫放置10min。

8.  12000 g離心10min，去上清，用75% EtOH浸洗沉淀，自然干燥約30 min。

9.  加入50 μl 1/10 TE或無(wú)菌水（含20 mM/RNase），置于4 ℃過(guò)夜，待DNA溶解后，檢測(cè)DNA濃度及質(zhì)量。

1.  盡量取材幼嫩葉片，如太老，酚類(lèi)物質(zhì)多，必須用10 mM的β-ME處理。

2.  研缽預(yù)凍，粉末至加CTAB前不要融化。

3.  24:1的lu仿/異戊醇抽提時(shí)動(dòng)作應(yīng)輕柔，轉(zhuǎn)移用的槍頭是剪寬了的。

4.  所用試劑必需滅菌，手套。