研生試劑-支原體檢測試劑盒說明書

產品簡介：
　　
　　支原體（mycoplasma）：又稱霉形體，為目前發現的zui小的zui簡單的原核生物，估計有15%~35%的細胞被支原體污染。支原體污染會對細胞造成多方面的影響，包括代謝、免疫或生化特性、生長狀況、以及細胞存活等多方面的改變，影響實驗結果的穩定性、可靠性和準確性；支原體難以檢測，同時也很難消除，其能輕易地通過0.22μm標準濾膜，同時也能拮抗絕大多數的抗生素，給細胞培養造成巨大損失。因此細胞都需要定期（如每2~3個月）進行支原體污染的檢測。許多方法可用于檢測支原體，包括肉湯或瓊脂培養，直接或間接的熒光染色、ELISA、直接或間接的PCR法等，其中，直接PCR法靈敏度高。本試劑盒能檢測支原體種類包括M.Hyorhinis,M.Arginini,M.Orale,M.Fermentans,A.laidlawii等常見支原體，這5種支原體代表了98%以上的細胞支原體污染。同時還能檢測Mycoplasma,Acholeplasma,Ureaplasma,Spiroplasma等種屬。
　　
　　產品實驗【操作流程】
　　
　　1、樣品準備：在實驗前幾天，細胞需用無抗生素的培養基進行培養，待細胞生長至80%以上開始試驗。
　　
　　A、樣品為細胞
　　
　　1、棄去培養瓶內的細胞培養基。
　　
　　2、用DPBS洗2次細胞。
　　
　　3、加入適量的裂解液（以24孔板為例，每孔100ul）裂解細胞，室溫放置5分鐘。
　　
　　4、收集細胞裂解液，放入離心管中。
　　
　　5、細胞裂解液95°C處理5分鐘。
　　
　　6、13000rpm離心5分鐘，上清轉入一只新離心管。
　　
　　7、取1~2ul上清作為模板進行PCR反應。
　　
　　B、樣品為培養上清
　　
　　1、取1~1.5ml細胞培養上清，放入離心管中。
　　
　　2、13000rpm離心5分鐘。
　　
　　3、棄上清，用DPBS洗沉淀一次。
　　
　　4、加入100ul裂解液裂解細胞，上下顛倒混勻后，室溫放置5分鐘。
　　
　　5、細胞裂解液95°C處理5分鐘。
　　
　　6、13000rpm離心5分鐘，上清轉入一只新離心管。
　　
　　8、取1~2ul上清作為模板進行PCR反應。
　　
　　2、PCR反應
　　
　　本試劑盒提供的8連管已預加入反應引物（其中8號管同時已預加入陽性模板，為陽性對照），使用前請先離心后小心開啟，以免飛揚丟失。Taq、pfu、KOD等酶及常規PCRMix都適用于本試劑盒的PCR反應，具體反應條件可以參考相關酶或者PCRMIX產品說明書。以Taq酶為例，推薦如下：

　　
　　3、結果判定
　　
　　在陰陽性對照成立的條件下，對樣品結果進行判定